確保核酸的純度和完整性是分子生物學應(yīng)用取得成功的基礎(chǔ)然而,提取過程中充滿了可能影響實驗結(jié)果的潛在陷阱無論是使用手動方法還是自動化核酸提取系統(tǒng),了解常見錯誤以及如何避免這些錯誤都至關(guān)重要本指南重點介紹了核酸提取中常見的十個錯誤,并提供了切實可行的解決方案,以確保實驗取得成功
1樣本原料不足或質(zhì)量不佳
樣本原料的質(zhì)量和數(shù)量會直接影響所提取核酸的產(chǎn)量和完整性樣本量過少會導致產(chǎn)量低,而降解或受污染的樣本則會使提取的核酸質(zhì)量受損
解決方案:在提取前仔細評估并定量樣本原料,確保正確儲存以防止材料降解對于某些應(yīng)用,可考慮采用富集步驟來提高目標核酸的濃度
2細胞或組織裂解不充分
有效的裂解對于從細胞和組織中釋放核酸至關(guān)重要裂解不充分或方法不當會顯著降低核酸產(chǎn)量
解決方案:根據(jù)樣本類型優(yōu)化裂解方案,具體方法包括機械破碎(如勻漿)化學裂解(使用裂解液)或酶消化確保裂解緩沖液適合你的樣本,并且孵育時間和溫度已優(yōu)化
3抑制劑殘留
許多生物樣本中含有會抑制下游酶促反應(yīng)(如聚合酶鏈式反應(yīng),即 PCR)的物質(zhì)在提取過程中如果不能完全去除這些抑制劑,可能會導致假陰性結(jié)果或定量不準確
解決方案:在提取方案中采用徹底的洗滌步驟,考慮使用能有效結(jié)合核酸同時將抑制劑洗去的離心柱或磁珠
4提取過程中核酸降解
DNA 和 RNA 容易受到樣本中存在的或提取過程中引入的核酸酶的降解
解決方案:操作要迅速,并在合適的溫度下進行(通常在冰上或按照方案中指定的溫度)提取 RNA 時使用 RNA 酶抑制劑,并確保所有試劑和耗材都不含核酸酶,核酸提取系統(tǒng)內(nèi)的受控環(huán)境有助于減少與潛在污染物的接觸
5樣本間交叉污染
將一個樣本中的核酸引入到另一個樣本中會導致假陽性結(jié)果,尤其是在使用如 PCR 這類高度靈敏的技術(shù)時
解決方案:嚴格執(zhí)行無菌操作技術(shù)每一步和每個樣本都使用新的移液器吸頭,按照單向工作流程處理樣本,從預(yù)擴增區(qū)域移至后擴增區(qū)域四億科學儀器MultiEX 系列核酸提取儀提供封閉系統(tǒng)和一次性試劑盒,可顯著降低交叉污染的風險
6核酸與固相的結(jié)合效率低
許多提取方法依賴于核酸與固相(如硅膠膜或磁珠)的結(jié)合,結(jié)合效率低會導致產(chǎn)量降低
解決方案:確保結(jié)合緩沖液組分和 pH 值正確,優(yōu)化孵育時間和混合步驟,最大限度地提高核酸結(jié)合率四億科學儀器核酸提取系統(tǒng),特別是與優(yōu)化后的提取試劑盒配合使用時,可確保高效且一致的結(jié)合,從而獲得可靠的結(jié)果
7固相洗滌不徹底
洗滌不充分會殘留污染物和結(jié)合緩沖液,這會干擾下游應(yīng)用
解決方案:嚴格按照洗滌方案操作,使用推薦體積和類型的洗滌緩沖液在洗脫前確保完全去除洗滌緩沖液四億科學儀器MultiEX 096P 核酸提取儀提供精確且可重復(fù)的洗滌步驟,可最大限度地減少人為誤差
8核酸洗脫效率低
洗脫是將純化后的核酸從固相上釋放下來的最后一步,洗脫效率低會導致回收率降低
解決方案:使用推薦的洗脫緩沖液和體積,按照方案中指定的條件優(yōu)化洗脫孵育時間和溫度四億科學儀器MultiEX 032 核酸提取儀允許自定義洗脫體積,為不同的下游應(yīng)用提供了靈活性
9提取的核酸儲存不當
提取后的核酸需要正確儲存以保持其完整性,儲存不當會導致核酸降解
解決方案:將 DNA 儲存在 - 20°C 或 - 80°C 的合適儲存緩沖液中,RNA 更不穩(wěn)定,通常需要儲存在 - 80°C避免反復(fù)凍融
10缺乏質(zhì)量控制
在進行下游應(yīng)用之前,如果不評估提取的核酸的質(zhì)量和數(shù)量,可能會在質(zhì)量不佳的樣本上浪費時間和資源
解決方案:始終使用分光光度計或熒光計對提取的 DNA 或 RNA 進行定量使用凝膠電泳或生物分析儀評估核酸的完整性四億科學儀器 MultiEX 系列核酸提取儀的穩(wěn)定可靠性能有助于獲得更多可預(yù)測且高質(zhì)量的核酸,從而簡化下游的質(zhì)量控制流程
通過了解并避免這些常見錯誤,研究人員可以顯著提高核酸提取過程的成功率和可靠性
四億科學儀器有限公司的核酸提取系統(tǒng)如何提供幫助
為應(yīng)對這些挑戰(zhàn),四億科學儀器有限公司提供了一系列核酸提取系統(tǒng),旨在簡化和規(guī)范提取過程:

MultiEX 016:非常適合中小通量的應(yīng)用,可實現(xiàn)高效提取,且操作時間短
MultiEX 032:這是一款多功能系統(tǒng),針對中等通量的實驗室進行了優(yōu)化,在確保高質(zhì)量提取的同時保持靈活性
MultiEX 024L:專為大體積核酸提取而設(shè)計,特別適用于需要較高樣本輸入量的應(yīng)用
MultiEX 096P:非常適合高通量實驗室,能夠同時處理多達 96 個樣本,從而提高效率和通量
四億科學儀器可靠的核酸提取系統(tǒng)可以進一步簡化提取過程,減少人為誤差,并確保為你的關(guān)鍵實驗提供高質(zhì)量的核酸產(chǎn)量